人B7同源體3(B7-H3)elisa試劑盒

　　人B7同源體3(B7-H3)elisa試劑盒使用說明書

　　以下是天津本生?人B7同源體3(B7-H3)ELISA試劑盒?的標準化操作指南，綜合多份說明書核心內容整理：

　　一、檢測原理?

　　采用雙抗體夾心法：

　　微孔板預包被B7-H3捕獲抗體

　　依次加入樣本、HRP標記檢測抗體，形成“抗體-抗原-酶標抗體”復合物

　　TMB顯色后，450nm測OD值，顏色深度與B7-H3濃度正相關

　　二、試劑盒組成?

　　預包被微孔板(48T/96T)

　　標準品(凍干粉，通常含S0-S5梯度，如0-32ng/mL)

　　HRP標記抗體、TMB顯色液、終止液(含硫酸)

　　20×濃縮洗滌液(需1:20稀釋)

　　三、樣本處理?

　　樣本類型 處理方法

　　血清? 室溫靜置2小時后，1000×g離心10分鐘，避免溶血

　　血漿? EDTA/肝素抗凝，采集后30分鐘內1000×g離心30分鐘

　　細胞上清? 1000×g離心10分鐘去除顆粒

　　組織勻漿? 按質量比1:9加入生理鹽水勻漿，1000×g離心10分鐘取上清

　　保存要求?：分裝后-20℃保存，避免反復凍融;NaN3會抑制HRP活性，需避免使用

　　四、操作步驟?

　　標準品復溶?：用1mL稀釋液溶解凍干標準品(如10,000pg/mL貯液)，梯度稀釋至78-5000pg/mL

　　加樣孵育?：

　　每孔加樣本/標準品50μL → HRP標記抗體50μL，37℃孵育60分鐘

　　洗滌?：手工洗板需加滿洗滌液，靜置1分鐘后甩干，重復5次

　　顯色?：

　　每孔加TMB 100μL，37℃避光顯色15-30分鐘(顯藍色)

　　加終止液50μL，顏色變黃

　　檢測?：450nm讀取OD值，用標準曲線計算濃度(樣本濃度=曲線值×稀釋倍數)

　　五、注意事項?

　　試劑保存?：2-8℃避光保存，使用前室溫平衡20分鐘;結晶需37℃水浴溶解

　　操作規范?：

　　避免金屬加樣器接觸終止液/底物

　　不同批號試劑不可混用

　　顯色時間需嚴格控制，避免強光直射

　　質量控制?：

　　批內CV<10%，批間CV<12%

　　S0孔(0濃度)作為陰性對照

　　六、結果示例?

　　標準曲線范圍通常為78-5000pg/mL，檢測下限約10pg/mL。溶血或高脂血樣本可能干擾結果，需預處理。

　　如需具體型號的差異步驟，請以對應試劑盒說明書為準。

　　如需具體試劑盒的差異步驟，請參考對應產品的說明書,以上僅供參考。

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