小鼠轉錄激活因子4(ATF4)ELISA試劑盒實驗使用說明書

　　小鼠轉錄激活因子4(ATF4)ELISA試劑盒實驗使用說明書

　　?小鼠轉錄激活因子4(ATF4)ELISA試劑盒實驗使用說明書主要涵蓋實驗目的、原理、試劑盒組成及操作步驟等關鍵信息?。以下是詳細說明：

　　實驗目的

　　本試劑盒用于測定小鼠血清、血漿及相關液體樣本中小鼠轉錄激活因子4(ATF4)的含量。這有助于研究ATF4在生物體內的表達水平及其與相關疾病或生理狀態的關系?12。

　　實驗原理

　　本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠轉錄激活因子4(ATF4)水平。具體原理為：用純化的小鼠轉錄激活因子4(ATF4)抗體包被微孔板，制成固相抗體。往包被單抗的微孔中依次加入轉錄激活因子4(ATF4)，再與HRP標記的轉錄激活因子4(ATF4)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物。經過洗滌后加底物TMB顯色，TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的轉錄激活因子4(ATF4)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，通過標準曲線計算樣品中小鼠轉錄激活因子4(ATF4)含量?1。

　　試劑盒組成

　　試劑盒通常包括以下組件(以48孔或96孔配置為例)：

　　微孔酶標板

　　標準品(含已知濃度的ATF4)

　　樣本稀釋液

　　檢測抗體-HRP(辣根過氧化物酶標記的檢測抗體)

　　底物TMB(四甲基聯苯胺)

　　洗滌液

　　終止液

　　其他必要配件(如封板膜、吸頭等)?13操作步驟

　　?準備試劑與樣本?：將試劑盒各組分置于室溫平衡，按說明書要求稀釋標準品和樣本。

　　?加樣?：在微孔板中分別加入標準品和樣本，每個樣本設置復孔以提高準確性。

　　?孵育?：按說明書要求的時間和溫度進行孵育，使抗體與抗原充分結合。

　　?洗滌?：使用洗滌液洗滌微孔板，去除未結合的抗體和雜質。

　　?加入檢測抗體?：向每個孔中加入HRP標記的檢測抗體，再次孵育。

　　?洗滌?：重復洗滌步驟，去除未結合的檢測抗體。

　　?顯色?：向每個孔中加入底物TMB，避光顯色。

　　?終止反應?：加入終止液停止顯色反應，此時孔內顏色由藍色變為黃色。

　　?測定吸光度?：使用酶標儀在450nm波長下測定各孔的吸光度(OD值)。

　　?計算濃度?：根據標準品的OD值和已知濃度繪制標準曲線，通過樣本的OD值在標準曲線上查找到對應的ATF4濃度?。

　　請嚴格按照說明書中的操作步驟進行實驗，以確保結果的準確性和可靠性。同時，注意實驗過程中的安全防護和廢棄物處理。